2022-07-18 10:47:16
来源: 成都壹科医疗
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PCR管采购介绍
PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性一退火—延伸三个基本反应步骤构成。这个反应过程在PCR反应容器中进行,随着基因扩增仪的不断发展,其反应容器也经历了从1.5ml到0.2ml (0.25m1)的离心管逐步发展成PCR专用的薄壁的0.2ml,0.1mlpcr管。
随着pcr扩增反应数量的提高,逐步形成了PCR条、PCR板高通量的基因扩增容器。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成
模板DNA的变性:
模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,以便它与引物结合,为下轮反应做准备。
模板DNA与引物的退火(复性):
模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右后,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
引物的延伸:
DNA模板——引物结合物在Taq的作用下,以dNTP为反应原料,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
PCR技术的基本原理
该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。
DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。
在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端,并以此为起始点,沿模板5´→3´方向延伸,合成一条新的DNA互补链。
PCR管和离心管的区别
PCR管:
PCR反应板是96孔或者384孔,是专门为批量反应设计的,其原理是PCR仪和测序仪的通量一般为96或者384。
离心管:
离心管不一定是PCR管,离心管按照其容量分好多种,常用的有1.5ml,2ml,5ml,15或者50ml,最小的一种((250ul)可作为PCR管使用。
如何选择PCR管
我们选择PCR管的放置位置是希望选择温度最准确的位置。
而温度最准确的位置应该是模块下温度传感器上面的位置(不考虑传感器温度不准的问题)。
而不同PCR仪的温度传感器的位置是不一样的。
比如AB的2720只有一个在中间,MJ的200有三个传感器,为左下、中间和右上,Eppendorf的应该是在A行或H行,而东胜龙811则有三个温度传感器,应选择B1-2,C1-2,C6-7,D6-7,B11-12,C11-12,因为这些点是温度准点。
2023-02-14 11:51:52
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2022-07-18 16:11:34
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